Iniciativa Fibromialgia

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Proyecto dirigido a obtener conclusiones destinadas a desarrollar nuevas estrategias de terapias para el tratamiento efectivo de la fibromialgia

Silvia Mercado Sáenz Dra. en Biología
Silvia Mercado Sáenz. Dra. en Biología

La fibromialgia es un trastorno que causa dolores musculares, articulares, tendinosos y viscerales, además de cansancio o fatiga. Entre el 80 y 90 por ciento de las personas a las que les diagnostican fibromialgia son mujeres. Sin embargo, los hombres y los niños también pueden tener el trastorno. La mayoría de los casos se diagnostican a una edad madura. Las personas que la sufren padecen dolor y un aumento de la sensibilidad en todo el cuerpo, pudiendo además tener otros síntomas como:

  • Dificultad para dormir
  • Rigidez por las mañanas
  • Dolores de cabeza
  • Periodos menstruales dolorosos
  • Sensación de hormigueo o adormecimiento en las manos y los pies
  • Falta de memoria o dificultad para concentrarse.

puntosdolorososLa fibromialgia es una enfermedad invisible. No aparece en radiografías ni en analíticas, por lo que su diagnosis y tratamiento es difícil. Fue reconocida por la Organización Mundial de la Salud como enfermedad en 1992. Las personas con fibromialgia, ante la falta de diagnóstico y la incomprensión del entorno, acaban por no compartir su dolor, siendo ésta una de las razones que hace que normalmente la enfermedad curse con episodios de ansiedad o depresión que la hacen aún más incapacitante.

Pretendemos realizar el estudio al mayor número de personas. Sin embargo, hemos dividido el proyecto en distintas fases según la financiación que vayamos obteniendo:

1º Objetivo: Estudio de 35 pacientes. 35.000 euros
2º Objetivo: Estudio de 60 pacientes: 60.000 euros
3º Objetivo: Estudio de 80 pacientes: 80.000 euros
4º Objetivo: Estudio de 100 pacientes: 100.000 euros.

En caso de no conseguir el Objetivo 1 el dinero recaudado se destinará a realizar tantos estudios como la financiación lo permita.

Partes del estudio

El estudio consta de tres fases o partes diferenciadas:

  1. Estudio del fenotipo (incluye estudio epigenético).
  2. Estudio del genotipo
  3. Investigación estadística en base a los resultados obtenidos en fases anteriores y  publicación de resultados.

Objetivos

Los objetivos buscados en las distintas fases son los siguientes:

Fase 1:

  • Encontrar un patrón fenotípico y/o epigenético que permita hallar las interrelaciones de la enfermedad y/o sus relaciones con otras patologías.
  • Comprobar las bases genéticas familiares en función con el fenotipo real del paciente.
  • Establecer un estudio de los riesgos de padecer la enfermedad a familiares de enfermos.
  • Estudiar las posibles causas aparecidas en el fenotipo de la enfermedad.

Fase 2:

  • Estudio de las variantes genéticas de pacientes con fibromialgia, mediante la evaluación de las variaciones presentes en el genoma completo, en base a los resultados obtenidos en el fenotipado.
  • Incorporación de los datos obtenidos a la base de datos de pacientes.

Fase 3:

  • Aumentar el conocimiento sobre esta enfermedad aún muy desconocida.
  • Realizar un estudio estadístico que permita relacionar los datos obtenidos en el fenotipado con con los datos obtenidos en el genotipado a fin de caracterizar el entorno genético de pacientes afectos de fibromialgia, con el propósito de establecer un patrón genético de referencia que facilite el diagnóstico, pronóstico y tratamiento de la enfermedad.
  • Publicación libre de los resultados obtenidos.
  • Desarrollar una prueba basada en los resultados obtenidos en el estudio que permita una rápida y eficaz diagnosis en los enfermos de fibromialgia.

Una vez realizadas las tres fases del proyecto y en base a los resultados obtenidos en los estudios se obtendrían conclusiones que darían lugar a que otras instituciones pudieran desarrollar nuevas estrategias de terapias para el tratamiento efectivo de la fibromialgia.

Las instituciones correspondientes deberían permitir la tipificación de esta enfermedad y su incorporación al marco legal dado su carácter altamente incapacitante.

Material y métodos

Se está creando una red de colaboradores a nivel mundial, a fin de obtener datos de pacientes de todas el mundo para que el estudio sea más completo, aunque se cree que se pueden encontrar suficientes voluntarios, no ya a nivel nacional sino a nivel provincial.

Se procederá a contactar con las asociaciones nacionales de fibromialgia para solicitar su colaboración en la búsqueda voluntarios para un estudio clínico.

A los voluntarios se le realizarán medidas antropométricas, se estudiarán sus antecedentes familiares, se les realizará un árbol genealógico atendiendo a las enfermedades de sus familiares directos, a fin de realizar un estudio fenotípico completo.

También se tomarán datos de los hábitos de vida de los pacientes, exposición a mutágenos, medicamentos que han tomado y duración de tratamiento, etc, para realizar el estudio epigenético. Todos los datos recogidos se introducirán en un sistema con software especializado en red, que se encarga de comparar los datos recabados con los de otros pacientes a nivel mundial registrados en bases de datos especializadas y de encontrar patrones en base a las características fenotípicas y epigenéticas de los pacientes.

A los pacientes voluntarios se les extraerá una muestra de sangre para un estudio genómico del genoma completo.

La prueba es muy amplia y tiene un rendimiento diagnóstico superior en comparación con los métodos convencionales de otras pruebas genéticas de análisis de genes individuales, o de exomas ya que se analizan simultáneamente la totalidad de los genes del individuo y se atiende igualmente a las características físicas y a la epigenética.

El estudio completo del genoma y la historia clínica familiar de los pacientes, nos permitirá no sólo encontrar posibles mutaciones en los genes, sino en las zonas reguladoras y confirmar o descartar la presencia de virus insertados, que es otra de las teorías que se maneja como posible causa de la enfermedad.

La colaboración de la asociación es imprescindible para contactar e informar a los enfermos, para servir de sede de extracción de muestras, recogida de documentación y para ser nexo de unión entre nuestro laboratorio y los pacientes, para difundir el proyecto, buscar patrocinadores, para dar respaldo social al proyecto, y para todas aquellas formas de colaboración que las asociaciones propongan. Pretendemos que nuestro proyecto sea un proyecto de las asociaciones y enfermos de fibromialgia.

Una vez la documentación y las muestras de sangre lleguen a nuestro laboratorio, se procederá:

  • Creación de un registro informático de los pacientes y su historial clínico en nuestro CRM de forma anónima.
  • Extracción y secuenciación del ADN del paciente mediante técnicas de alta resolución.
  • Estudio completo de las variantes genómicas encontradas mediante supercomputación.

Cuando se trata de buscar mutaciones comunes en enfermos de fibromialgia, se efectúa un complejo mapeo de las secuencias de cada uno de los individuos, se identifican las variaciones en la población analizada y, finalmente, se emplean controles (secuencias de individuos sanos) para filtrar esas variaciones. Así, se identifican, entre todas las mutaciones encontradas, aquellas que son compatibles con la enfermedad.

Todo ello, precisa de una infraestructura bioinformática compleja (supercomputación), no sólo capaz de facilitar este filtrado de información, sino también de aclarar si las mutaciones son o no conocidas previamente, si producen cambios de aminoácidos en la proteína resultante, si se ubican en zonas no codificantes del gen,…

En base a los resultados del análisis mediante supercomputación, un equipo multidisciplinar, sacará conclusiones y se realizarán publicaciones y envíos a congresos.

Se pretende encontrar financiación para el proyecto a través de Crowdfunding, de forma que el estudio no tendrá coste alguno ni para la asociación ni para los pacientes, aunque ambos si lo desean, podrán colaborar en la medida de sus posibilidades.

Pensamos que un proyecto de esta envergadura, con afectados en todo el mundo, si se le da la difusión adecuada, puede fácilmente subvencionarse por este medio, ya que existen precedentes que así lo atestiguan. Es frecuente en este tipo de proyectos, no solo alcanzar la financiación deseada, sino superarla ampliamente. Si esto aconteciese, ampliaría el número de pacientes analizados.

FASES

1ª FASE: Estudio fenotípico y epigenético 16 semanas

Recogida de documentación y muestras

Se contactará con asociaciones de enfermos de fibromialgia a fin de seleccionar a entre 35 y 100 pacientes voluntarios diagnosticados de esta patología.

A los pacientes seleccionados, se les pedirá un consentimiento informado para hacerles un estudio genético, así como su historia clínica, su historia clínica familiar, hábitos de vida,…se le tomarán medidas antropométricas y las terapias que están siguiendo en la actualidad y las que han seguido desde el principio de su enfermedad. Estos documentos se etiquetaran con una referencia.

A cada paciente se le sacará una muestra de 10 ml. sangre periférica por profesionales sanitarios que se desplazaran a la sede de su asociación.

La muestra extraída se conservará en EDTA y se enviará a nuestro laboratorio a temperatura ambiente en los tubos etiquetados con la referencia correspondiente a la historia clínica del paciente y debidamente protegidos para evitar su deterioro.

Se obtendrán también muestras de 2 personas sanas para ser utilizadas como controles.

Luego el total de muestras a tratar será de 102.

Tiempo estimado: 8 semanas

Creación de registro informático

Los datos de los pacientes se introducirán en nuestro registro informático (CRM), y se le asignará a cada paciente una referencia, de forma que el investigador no conozca en ningún momento del experimento dato alguno de los pacientes, a fin de realizar un estudio doble ciego.

Los datos de los pacientes quedarán registrados y encriptados en una base de datos registrada que cumplirá exhaustivamente con la LOPD vigente.

Tiempo estimado: 8 semanas

2ª FASE: Extracción y secuenciación del ADN. 16 semanas

Una vez en nuestras dependencias, nuestro personal facultativo voluntario identificará y etiquetará la muestra con la referencia correspondiente a los datos introducidos en el CRM y estás se almacenarán en nuestros equipos frigoríficos hasta el momento de la extracción de ADN. Se procederá a la extracción y amplificación del ADN de las muestras en 2 lotes:

  • 1º lote de 50% muestras + control
  • 2º lote de 50% muestras + control

Una vez extraído el ADN éste se conservará a -20ºC hasta que se proceda a la secuenciación. Esta fase se hará en paralelo con la fase siguiente, de forma que no se extraerá el ADN del segundo lote, hasta que el primero no esté completamente secuenciado, para que el ADN extraído no permanezca más de 30 días congelado.

Tiempo estimado: 16 semanas

Secuenciación masiva de los genomas.

Esta fase se realizará, tal como se ha dicho, en paralelo con la anterior, conforme se tenga el ADN de las muestras aislado.

Tiempo estimado: 16 semanas

3ª FASE: Análisis bioinformático por supercomputación 26 semanas

Una vez se tengan los resultados de la secuenciación estos datos en formato FastQ se introducirán en nuestro supercomputador que comparará los datos de todas las muestras con 1000 genomas de referencia publicados en bases de datos internacionales lo que ayuda a identificar las variantes causales que podrían explicar el desorden en el paciente afectado, a fin de encontrar cualquier diferencia genética existente entre los genomas analizados y los de referencia. Se realizarán filtrados en las variantes encontradas para saber cuáles realmente causan un efecto deletéreo y potencialmente patogénico sobre la proteína; y cuáles, además, no han sido descritos antes.

  • Filtrado de polimorfismos habituales en la población (dbSNP, 1000genomes).
  • Detección de variantes de alta calidad:
  • Sustituciones de un solo nucleótido (SNPs)
  • Pequeñas inserciones y deleciones (InDels)
  • Variantes estructurales (SVs)
  • Cambios en el número de copia (CNVs)
  • Anotación de las variantes obtenidas y predicción del efecto funcional de las mismas.
  • Comparación entre muestras procedentes del mismo estudio.

En base a estos resultados, las variaciones genéticas de todo el genoma de los pacientes se cruzarán entre ellas mediante ANOVA (Análisis de multivarianza) para tratar de encontrar patrones genéticos presentes en todos los pacientes.

Tiempo estimado: 16 semanas

Conclusiones y publicación de artículos

Con los resultados encontrados, nuestro equipo multidisciplinar formado por biólogos, médicos, microbiólogos, genetistas y bioinformáticos, extraerá conclusiones que se publicarán en prestigiosas revistas del sector.

Los resultados se le enviarán en un pen-drive, de forma individual a cada paciente, donde además del genoma en FasQ se incluirá un informe personalizado para cada uno.

Tiempo estimado: 10 semanas

Tiempo total estimado: 58 semanas (2 fases se solapan)

Objetivo de financiación

Pretendemos realizar un estudio a tantas personas como podamos, pero lo hemos dividido en distintas fases según la financiación obtenida:

  • 1º Objetivo: Estudio de 35 pacientes. 35.000 euros
  • 2º Objetivo: Estudio de 60 pacientes: 60.000 euros
  • 3º Objetivo: Estudio de 80 pacientes: 80.000 euros
  • 4º Objetivo: Estudio de 100 pacientes: 100.000 euros.

El presupuesto total del proyecto es superior 416.302 €. Pero se tiene el uso del equipamiento deforma gratuita y los colaboradores se han comprometido a aportar su trabajo al proyecto, por lo que realmente se precisa son 1000 euros por paciente, para reactivos, fungible, transporte de muestras, costes indirectos y otros gastos de investigación. En el caso de sobrepasarse el capital recaudado, y que no surgiesen gastos imprevistos, se aumentaría el número de pacientes a los que realizar las pruebas.

Financiación de según objetivos

1º Objetivo: Estudio de 35 pacientes. 35000 euros

  • Reactivos y material fungible: 30.500 euros
  • Transporte de muestras: 1.500 euros
  • Costes indirectos 1.500 euros
  • Asistencia a congresos 1.500 euros

2º Objetivo: Estudio de 60 pacientes: 60000 euros

  • Reactivos y material fungible: 53.350 euros
  • Transporte de muestras: 2.575 euros
  • Costes indirectos 2.575 euros
  • Asistencia a congresos 1.500 euros

3º Objetivo: Estudio de 80 pacientes: 80000 euros

  • Reactivos y material fungible: 71.500 euros
  • Transporte de muestras: 3.500 euros
  • Costes indirectos 3.500 euros
  • Asistencia a congresos 1.500 euros

4º Objetivo: Estudio de 100 pacientes: 100000 euros.

  • Reactivos y material fungible: 90.000 euros
  • Transporte de muestras: 4.250 euros
  • Costes indirectos 4.250 euros
  • Asistencia a congresos 1.500 euros

Además de financiación buscamos colaboradores en todo el mundo.

Colaboradores

Buscamos todo tipo de personas interesadas en colaborar, como por ejemplo:

  • Pacientes que quieran aportar sus datos clínicos para el proyecto
  • Familiares de pacientes
  • Asociaciones de pacientes
  • Personas que ayuden a los pacientes a recopilar datos
  • Personas que puedan dar difusión a nuestra iniciativa a través de las redes sociales
  • Cualquier persona que quiera colaborar y nos indique cómo.
  • Entidades que deseen colaborar en el proyecto
  • Personas que ayuden a introducir y a revisar datos (deben ser facultativos o técnicos
    biosanitarios como: Médicos, Biólogos, Genetistas, Consejeros genéticos, Enfermeros…).

Requisitos

  • Los colaboradores firmarán una clausula de confidencialidad y colaboración con el
    proyecto.
  • Los pacientes que proporcionen sus datos darán el consentimiento informado al tratamiento
    de los mismos.

Garantías

  • Los datos serán totalmente confidenciales. Los pacientes serán identificados por sus iniciales
    y por un número aleatorio que proporciona el sistema, de forma que no puedan ser identificados.
  • Las pruebas a realizar a los pacientes para la recogida de datos por parte de los
    colaboradores no son en absoluto invasivas y cumplen con la normativa ética vigente.
  • El estudio es totalmente anónimo, quedando registrada en la base de datos únicamente las
    iniciales del paciente y de sus familiares y un número interno que asigna la base de datos.
  • Nuestra base de datos está registrada en la LOPD y cumple los requisitos de la misma.

Equipo Humano

  • Silvia Mercado Sáenz: Licenciada en Biología. Doctora por la Universidad de Málaga. Master en Biotecnología. Investigadora Colaboradora Postdoctoral de la Universidad de Málaga. (Facultad de Medicina, Dpto. de Radiología, Medicina física y ORL). Amplia experiencia docente e investigadora. ORCID ID: 0000-0002-0002-8471. Scopus Author ID: 36863804100.
  • Elias Granizo Zafrilla: Dr. en Medicina. Amplia experiencia docente e investigadora. Amplios conocimientos informáticos.
  • Miguel J. Ruíz Gomez: Doctor en Biología. Profesor contratado Doctor de la Universidad de Málaga. (Facultad de Medicina, Dpto. De Radiología, Medicina física y ORL). Amplia experiencia docente e investigadora. ORCID iD: 0000-0003-4630-7588. Scopus Author ID: 56962771400 Researcher ID: G-9980-2011.
  • José J. Reina Pinto: Ldo. en Biología. IHSM La Mayora CSIC-UMA. Amplia experiencia investigadora.
  • José Antonio Morales Moreno: Ldo. en Biología. Amplia experiencia investigadora.
  • Beatriz López Díaz: Licenciada en Biología. Doctora por la Universidad de Málaga.
    Investigadora Colaboradora Postdoctoral de la Universidad de Málaga. (Facultad de Medicina, Dpto. de Radiología, Medicina física y ORL). Amplia experiencia docente e investigadora. ORCID ID: 0000-0001-5176-1852. Scopus Author ID: 56303296600
  • Antonio M. Burgos Molina: Ldo. en Biología.Investigador Predoctoral de la Universidad de Málaga. (Facultad de Medicina, Dpto. de Radiología, Medicina física y ORL). ORCID ID: 0000-0001-5663-5134.
  • Alberto de Linares Sáez: Ldo. en Veterinaria. Máster Dirección de Marketing y Gestión Comercial. Amplia experiencia comercial.
  • Ana Cristina Carrillo Teba: Aux. Técnico de Enfermería. Amplia experiencia con personas dependientes

El equipo humano son compañeros, amigos y colegas que trabajarán en el proyecto de forma desinteresada.

Más información

En la página del proyecto http://ifibromialgia.blogspot.com  puedes encontrar más información sobre la fibromialgia y los motivos que nos han llevado a realizar este proyecto. Iremos actualizando semanalmente con todos los avances.

Al final de cada fase, publicaremos un resumen económico de los gastos realizados, para que los donantes sepáis en que se invierte vuestro dinero.

La investigación se llevará a cabo en Laboratorios Xenogene, aunque es posible que otros colaboradores también ofrezcan sus instalaciones.

¡Ayúdanos a hacer de la fibromialgia una enfermedad visible!

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